實(shí)驗(yàn)人員如何安全地使用生物安全柜？

    生物安全柜前的空氣幕很脆弱，易受到干擾而造成污染。實(shí)驗(yàn)中不能隨意開(kāi)啟前窗的位置，操作動(dòng)作緩和，手臂避免頻繁出入安全柜，以防止打擾氣流。在安全柜工作時(shí)，開(kāi)關(guān)房門、人員在房間內(nèi)走動(dòng)、甚至在操作人員背后咳嗽等都會(huì)形成湍流而增加微生物氣溶膠溢出量，而造成實(shí)驗(yàn)室污染。

1. 位置

空氣通過(guò)前面開(kāi)口進(jìn)入生物安全柜的速度大約為0.45m/s。這樣速度的定向氣 流是易受到干擾的，包括人員走近生物安全柜所形成的氣流，打開(kāi)窗戶，送 風(fēng)系統(tǒng)調(diào)整以及開(kāi)關(guān)門等都可能造成影響。

因此，為理想的是，生物安全柜應(yīng)位于人員活動(dòng)，物品流動(dòng)以及可能會(huì)擾亂 氣流的地方。在安全柜的后方以及每一個(gè)側(cè)面要盡可能留有30cm的空間，以利 用對(duì)安全柜的維護(hù)。在安全柜的上面應(yīng)留有30-35cm的空間，以便測(cè)量空 氣通過(guò)排風(fēng)過(guò)濾器的速度，并便于排風(fēng)過(guò)濾器的更換。

2. 操作人員 

生物安全柜如果使用不當(dāng)，其防護(hù)作用就可能大大地受到影響。操作人員在移動(dòng)雙臂進(jìn)出安全柜時(shí)，需要小心維持前面開(kāi)口處氣流的完整性，雙臂應(yīng)該垂直地緩慢進(jìn)出前面的開(kāi)口。

手和雙臂伸入到生物安全柜中等待大約一分鐘，以便安全柜調(diào)整完畢并且讓里面的空氣“掃過(guò)”手和雙臂的表面以后，才可以開(kāi)始對(duì)物品進(jìn)行處理。要在開(kāi)始實(shí)驗(yàn)之前將所有必須的物品置于安全柜內(nèi)，以盡可能減少雙臂進(jìn)出前面開(kāi)口的次數(shù)。

3.物品放置 

二級(jí)生物安全柜前面的進(jìn)氣格柵不能被紙，儀器設(shè)備或其他物品阻擋。放入安全柜內(nèi)的物品應(yīng)采用70%酒精來(lái)消除表面污染?？梢栽谙緞┙竦拿砩线M(jìn) 行實(shí)驗(yàn)，以吸收可能濺出的液滴。所有物品應(yīng)盡可能地放在工作臺(tái)后部靠近工作臺(tái)邊緣的位置，并使其在操作中 不會(huì)阻擋候補(bǔ)格柵。可產(chǎn)生氣溶膠的設(shè)備(例如混勻器，離心機(jī)等)應(yīng)靠近安全 柜的后部放置。像有生物危害性的廢棄物袋，盛放廢棄吸管的盤子以及吸濾瓶 等體積較大的物品，應(yīng)該放在安全柜內(nèi)的某一側(cè)。在工作臺(tái)面上的實(shí)驗(yàn)操作應(yīng) 該按照從清潔區(qū)到污染區(qū)的方向進(jìn)行。

耐高壓滅菌的生物危害性廢棄物袋以及吸管盛放盤不應(yīng)放在安全柜的外面，否 則在使用這些物品時(shí)雙臂就必須頻繁進(jìn)出安全柜，這樣會(huì)干擾安全柜空氣屏障 的完整性，從而影響對(duì)人員和物品的防護(hù)。

4.操作和維護(hù)

大多數(shù)生物安全柜的設(shè)計(jì)允許全天24小時(shí)工作。人員還發(fā)現(xiàn)，連續(xù)工作有助于控制實(shí)驗(yàn)室中灰塵和顆粒的水平。向房間中排風(fēng)或通過(guò)套管接口與專門的 排風(fēng)管相連接的A1和A2型生物安全柜，在不使用時(shí)是可以關(guān)閉的。其他如二級(jí)B1和二級(jí)B2型生物安全柜，是通過(guò)硬管安裝的，就必須始終保持空氣流動(dòng) 以維持房間空氣的平衡。在開(kāi)始工作以前以及完成工作以后，應(yīng)至少讓安全柜工作5分鐘來(lái)完成“凈 化”的過(guò)程，應(yīng)即應(yīng)留在將污染的空氣派出安全柜的時(shí)間。

5.紫外燈 

生物安全柜中不需要紫外燈。如果使用紫外燈的話，應(yīng)該每周進(jìn)行清潔，以除去可能影響其殺菌效果的灰塵和污垢。在安全柜重新認(rèn)證時(shí)，要檢查紫外線的強(qiáng)度，以確保有適當(dāng)?shù)墓獍l(fā)射量。房間中有人時(shí)一定要關(guān)閉紫外燈，以保護(hù)眼 睛和皮膚，避免因不慎暴露而造成傷害。

6.明火 

在生物安全柜內(nèi)所形成的幾乎沒(méi)有微生物的環(huán)境中，應(yīng)避免使用明火。使用明火會(huì)對(duì)氣生影響，并且在處理?yè)]發(fā)性物品和易燃物品時(shí)，也易造成危險(xiǎn)。 在對(duì)接種環(huán)進(jìn)行滅菌時(shí)，可以使用微型燃燒器或電爐，而不應(yīng)使用明火。

7. 溢出 

實(shí)驗(yàn)室中要張貼如何處理溢出物的實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)則，每一位使用實(shí)驗(yàn)室的成員 都要閱讀并理解這些規(guī)程。一旦在生物安全柜中發(fā)生由生物學(xué)危害的物品溢 出時(shí)，應(yīng)在安全柜出于工作狀態(tài)下立即進(jìn)行清理。要使用有效的消毒劑，并在 處理過(guò)程中盡可能減少氣溶膠的生成。所有接觸溢出物品的材料都要進(jìn)行消 毒/或高壓滅菌。

8. 安全柜防護(hù)效果的評(píng)估應(yīng)該包括對(duì)安全柜的完整性，HEPA過(guò) 濾器的泄漏，向下氣流的速度，正面氣流的速度，負(fù)壓/換氣次數(shù)，氣流的煙 霧模式以及警報(bào)和互鎖系統(tǒng)進(jìn)行測(cè)試。

還可以選擇進(jìn)行漏電，光照度，紫外線強(qiáng)度，噪聲水平以及震動(dòng)性的測(cè)試。在進(jìn)行這些測(cè)試時(shí)，檢測(cè)人員要經(jīng)過(guò)專門的培訓(xùn)，采用專門的技術(shù)和儀器設(shè)備。

9. 清潔和消毒 

由于剩余的培養(yǎng)基可能會(huì)使微生物生長(zhǎng)繁殖，因此在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，包括儀器設(shè) 備在內(nèi)的生物安全柜里的所有物品都應(yīng)清楚表面污染，并移出安全柜。在每次使用前后，要清除生物安全柜內(nèi)表面的污染。工作臺(tái)面和內(nèi)壁要用消毒 劑進(jìn)行擦拭，所用的消毒劑要能夠殺死安全柜里可能發(fā)現(xiàn)的任何微生物。在每 天試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，應(yīng)擦拭生物安全柜的工作臺(tái)面，四周以及玻璃的內(nèi)外側(cè)等部位 來(lái)清除表面的污染。在對(duì)目標(biāo)生物體有效時(shí)，可以采用漂白劑溶液或70%酒精 來(lái)消毒。在使用如漂白劑等腐蝕性消毒劑后，還必須用無(wú)菌水再次進(jìn)行擦拭。將安全柜一直維持運(yùn)行狀態(tài)。如果要關(guān)閉的話，則應(yīng)在關(guān)機(jī)前運(yùn)行5分鐘 以凈化內(nèi)部的氣體。

10. 清除污染 

生物安全柜在移動(dòng)以及更換過(guò)濾器之前，必須清除污染。常用的方法是采用 甲醛蒸汽熏蒸。應(yīng)該由有資質(zhì)的人員來(lái)清除生物安全柜的污染。

11.個(gè)體防護(hù)裝備 

在使用生物安全柜時(shí)應(yīng)穿著個(gè)體防護(hù)服。在進(jìn)行和二級(jí)生物安全水平的操 作時(shí)，可穿著普通試驗(yàn)服。前面加固處理的反背式試驗(yàn)隔離衣具有更好的防護(hù) 效果，應(yīng)在進(jìn)行三級(jí)和四級(jí)生物安全水平(防護(hù)服型實(shí)驗(yàn)室除外)的操作時(shí)使 用。手套應(yīng)套在隔離衣的外面，可以戴加有松緊帶的套袖來(lái)保護(hù)人員的手 腕。有些操作可能還需要戴口罩和安全眼鏡。

12.警報(bào)器 

可以在兩種警報(bào)器中選擇一種來(lái)裝備生物安全柜。窗式警報(bào)器只能裝在帶有滑 動(dòng)窗的安全柜上。發(fā)出警報(bào)時(shí)表明操作者將滑動(dòng)窗移到了不當(dāng)?shù)奈恢谩Ｌ幚磉@種警報(bào)時(shí)，只要將滑動(dòng)窗移到適宜的位置就可以了。氣流警報(bào)器報(bào)警時(shí)，表明 安全柜的正常氣流模式受到了干擾，操作者或物品當(dāng)即處于危險(xiǎn)狀態(tài)。當(dāng)氣流 警報(bào)響起時(shí)，應(yīng)立刻停止工作，并通知實(shí)驗(yàn)室主管。

13.選擇正確類型的生物安全柜，進(jìn)行安裝并正確使用，同時(shí)每年進(jìn)行認(rèn)證，這是 一個(gè)復(fù)雜的程序。強(qiáng)烈在經(jīng)過(guò)良好培訓(xùn)并具有豐富生物安全操作經(jīng)驗(yàn)的專家監(jiān)督下來(lái)進(jìn)行上述工作。該專家應(yīng)非常熟悉“參考文獻(xiàn)”部分中所列出的相 關(guān)文獻(xiàn)，并且經(jīng)過(guò)了有關(guān)生物安全柜各方面的培訓(xùn)。操作者應(yīng)接受生物安全柜操作和使用的正規(guī)培訓(xùn)。