藥品檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室通常包含理化實(shí)驗(yàn)室和微生物實(shí)驗(yàn)室兩部分；理化實(shí)驗(yàn)室運(yùn)用物理、化學(xué)的方法對(duì)生產(chǎn)用的原輔料、包裝材料、中間體及成品等進(jìn)行鑒別、含量測(cè)定等分析和檢驗(yàn)，其結(jié)果作為檢品是否符合法定要求和企業(yè)內(nèi)部質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的依據(jù)。

微生物實(shí)驗(yàn)室一般具有以下功能：

① 按2015《中國藥典》要求，進(jìn)行微生物檢驗(yàn)方法的驗(yàn)證、無菌檢查、微生物限度檢查、***效價(jià)的微生物檢定、青霉素酶及其活力測(cè)定。

② 按現(xiàn)行2010《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》的要求，對(duì)醫(yī)藥工業(yè)潔凈室的潔凈度進(jìn)行微生物測(cè)定，對(duì)無菌生產(chǎn)區(qū)環(huán)境日常動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)以及生產(chǎn)過程 中其他需要進(jìn)行微生物檢測(cè)的地方，如對(duì)無菌過濾器的驗(yàn)證、環(huán)境及設(shè)備**效果的驗(yàn)證、**效果的驗(yàn)證、無菌藥品包裝密封性驗(yàn)證中 微生物挑戰(zhàn)性試驗(yàn)等。

③ **內(nèi)**檢查、注射劑的不溶性微粒檢查，這類檢查雖不是檢查微生物，但它們對(duì)檢查環(huán)境有較高的要求，通常設(shè)在微生物實(shí)驗(yàn)室。

環(huán)境要求                          

微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)按相關(guān)國家標(biāo)準(zhǔn)制定完整的潔凈室（區(qū)）和隔離系統(tǒng)的驗(yàn)證和環(huán)境監(jiān)測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，環(huán)境監(jiān)測(cè)項(xiàng)目和監(jiān)測(cè)頻率及對(duì)超標(biāo)結(jié)果的處理應(yīng)有書面程序。監(jiān)測(cè)項(xiàng)目應(yīng)涵蓋到位，包括對(duì)空氣懸浮粒子、浮游菌、沉降菌、表面微生物及物理參數(shù)（溫度、相對(duì)濕度、換氣次數(shù)、氣流速度、壓差、噪聲等）的有效地控制和監(jiān)測(cè)。環(huán)境監(jiān)測(cè)按藥品潔凈實(shí)驗(yàn)室微生物監(jiān)測(cè)和控制指導(dǎo)原則（通則9205）進(jìn)行。

 2 微生物實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)的有關(guān)要求        

藥品生產(chǎn)企業(yè)微生物實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì) 2010《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》要求藥品生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)負(fù)責(zé)藥品生產(chǎn)全過程的質(zhì)量管理和檢驗(yàn)，并配備與藥品生產(chǎn)規(guī)模、品種、檢驗(yàn)要求相適 應(yīng)的人員、場(chǎng)所、儀器、設(shè)備。在進(jìn)行微生物實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)時(shí)，應(yīng)了解檢驗(yàn)流程、過程性質(zhì)、有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范的規(guī)定等，結(jié)合藥品生產(chǎn)企業(yè) 生產(chǎn)品種、檢驗(yàn)工作量的大小合理布置相應(yīng)的微生物檢驗(yàn)功能間。

在藥品的微生物學(xué)檢驗(yàn)中，為了保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確、可靠，針對(duì)微生物學(xué)檢驗(yàn)產(chǎn)生影響的幾種因素需要采取相應(yīng)的措施，通常為以下幾 種：

① 藥品本身的抑菌性或藥品中防腐劑的抑菌性。它們會(huì)掩蓋無菌藥品已受污染的事實(shí)或造成低于實(shí)際污染水平的菌檢結(jié)果。通常采用生長 比較法，在實(shí)際檢驗(yàn)條件下，通過比較對(duì)照接種試驗(yàn)菌或陽性菌在有無供試品的狀態(tài)下的生長情況，來驗(yàn)證供試品在該檢驗(yàn)方法下的抑菌 性。

② 標(biāo)準(zhǔn)菌種（試驗(yàn)菌或陽性菌）制備與傳代、種類及生長狀態(tài)需符合現(xiàn)行《中國藥典》要求。

③ 培養(yǎng)基的促菌生長能力：培養(yǎng)基應(yīng)具備廣譜性，有助于檢品中所有存活微生物的生長。通過接種不同試驗(yàn)菌并觀察它們的生長狀態(tài)，進(jìn) 行培養(yǎng)基靈敏度驗(yàn)證試驗(yàn)。

④ 檢驗(yàn)器具，如過濾系統(tǒng)的濾器、濾膜性質(zhì)、 材質(zhì)等性能，淋洗液、稀釋劑、培養(yǎng)基的無菌性及操作程序等，通常進(jìn)行陰性對(duì)照試驗(yàn)來檢驗(yàn)其影響。

⑤ 培養(yǎng)條件（溫度、濕度及需氧或厭氧）及檢測(cè)環(huán)境應(yīng)符合相關(guān)要求。

2.1 無菌檢查實(shí)驗(yàn)室          

2.1.1 用途       

用于檢查藥典要求無菌的藥品、醫(yī)療器具、原料、輔料及其他品種是否無菌。

2.1.2 《中國藥典》對(duì)無菌檢查實(shí)驗(yàn)室要求

藥品生產(chǎn)企業(yè)微生物實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì) 無菌檢查應(yīng)在環(huán)境潔凈度10 000級(jí)下的局部潔凈度100級(jí)的單向流空氣區(qū)域內(nèi)或隔離系統(tǒng)中進(jìn)行，其全過程必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止 微生物污染。單向流空氣區(qū)、工作臺(tái)面及環(huán)境應(yīng)定期按《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測(cè)試方法》的現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn) 進(jìn)行潔凈度驗(yàn)證。隔離系統(tǒng)按相關(guān)的要求進(jìn)行驗(yàn)證，其內(nèi)部環(huán)境的潔凈度須符合無菌檢查的要求。

2.2 微生物限度檢查實(shí)驗(yàn)室  

2.2.1 用途

用于檢查非規(guī)定**制劑及其原料、輔料受微生物污染的程度。檢查項(xiàng)目包括**數(shù)、霉菌數(shù)、酵母菌數(shù)及控制菌檢查。

 2.2.2《中國藥典》

對(duì)微生物限度檢查實(shí)驗(yàn)室的要求

微生物限度檢查應(yīng)在環(huán)境潔凈度10 000級(jí)下的局部潔凈度100級(jí)的單向流空氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行。檢驗(yàn)全過程必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止再污染。單向流空氣區(qū)域、工作臺(tái)面及環(huán)境應(yīng)定期按《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測(cè)試方法》的現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行潔凈度驗(yàn)證。

 微生物實(shí)驗(yàn)的各項(xiàng)工作應(yīng)在專屬的區(qū)域進(jìn)行，以降低交叉污染、假陽性結(jié)果和假陰性結(jié)果出現(xiàn)的風(fēng)險(xiǎn)。無菌檢查應(yīng)在B級(jí)背景下的*單向流潔凈區(qū)域或隔離系統(tǒng)中進(jìn)行，微生物限度檢查應(yīng)在不低于D級(jí)背景下的B級(jí)單向流空氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行。*和B級(jí)區(qū)域的空氣供給應(yīng)通過終端高效空氣過濾器（HEPA）。

2.3 ***效價(jià)的微生物檢定室    

2.3.1 用途

在適宜條件下，根據(jù)量反應(yīng)平行線原理設(shè)計(jì)，通過檢測(cè)***對(duì)微生物的抑制作用，計(jì)算***活性（效價(jià)）2.3.2 《中國藥典》[1]對(duì)***效價(jià)的微生物檢定室的環(huán)境潔凈度未有明確規(guī)定要求 在國家食品藥品監(jiān)督管理局2000年9月頒發(fā)的《藥品檢驗(yàn)所實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理規(guī)范（試行）》中第十八條中規(guī)定有“***微生物檢定實(shí)驗(yàn)室分為半無菌操作間和緩沖間。半無菌操作間設(shè)有紫外線燈，操作臺(tái)宜穩(wěn)固，并保持水平。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)光線明亮，并有控制溫度、濕度的設(shè)備”。通常按潔凈度100 000級(jí)設(shè)計(jì)。

***效價(jià)的微生物檢定實(shí)驗(yàn)所用燒杯、漏斗、移液管、容量瓶、滴管、小鋼管等器皿應(yīng)與其他器皿分開洗滌，檢定用平板與其他培 養(yǎng)基平板也應(yīng)分開洗滌，防止***對(duì)其他微生物培養(yǎng)的污染。

2.4 **內(nèi)**檢查用室

2.4.1 用途

利用鱟試劑來檢測(cè)或量化由革蘭陰性菌產(chǎn)生的**內(nèi)**，以判斷供試品中**內(nèi)**的*是否符合規(guī)定。適用于某些不能用家兔進(jìn)行 熱原檢測(cè)的品種，如放射**劑腫瘤抑制劑等，因?yàn)檫@些制劑具有細(xì)胞毒性而有一定的生物效應(yīng)。目前一般認(rèn)為特別適用于生產(chǎn)過程中的 熱原控制，因?yàn)樵摍z查法操作簡(jiǎn)單，實(shí)驗(yàn)費(fèi)用少，結(jié)果迅速可得。但該檢查法對(duì)革蘭陰性菌以外的內(nèi)**不夠敏感，故尚不能代替家兔熱 原法。

2.4.2 《中國藥典》中要求 進(jìn)行**內(nèi)**含量測(cè)定試驗(yàn)所用的器皿需經(jīng)處理，以去除可能存在的外源性內(nèi)**，試驗(yàn)操作過程應(yīng)防止微生物的污染，在清凈環(huán)境中進(jìn)行，在層流工作臺(tái)內(nèi)操作。實(shí)驗(yàn)前，須用肥皂洗手，用75%乙醇（*好用叔丁醇代替乙醇）棉球**。但《中國藥典》中未對(duì)**內(nèi)毒素檢查用室的環(huán)境潔凈度明確規(guī)定要求。一般來說**內(nèi)**檢查用室為半無菌操作間：室內(nèi)設(shè)**紫外燈，潔凈度要求一般為100 000 級(jí)。也有一些藥廠為了節(jié)省能耗而將其設(shè)置為一般環(huán)境。

2.5 不溶性微粒檢查用室   

2.5.1 用途

在可見異物檢查符合規(guī)定后，用以檢查溶液型靜脈用注射劑中不溶性微粒的大小和數(shù)量。

2.5.2 《中國藥典》[1]要求試驗(yàn)操作環(huán)境應(yīng)不得引入微粒，測(cè)定前的操作應(yīng)在層流凈化臺(tái)下進(jìn)行。玻璃儀器和其他所需的用品應(yīng)潔凈無微粒，本法所用微粒檢查用水（或溶劑）使用前須經(jīng)不大于1.0 um的微孔濾膜濾過。

2.5.3 因《中國藥典》要求注射用水須進(jìn)行**內(nèi)**檢測(cè)，因此溶液型靜脈用注射劑的不溶性微粒檢查可與**內(nèi)**檢查用室設(shè)成一 間，不用專設(shè)一室，配置相應(yīng)的層流凈化臺(tái)。

3 有關(guān)問題及案例

3.1 陽性接種室      

（1）微生物檢驗(yàn)離不開對(duì)標(biāo)準(zhǔn)菌種及所檢測(cè)的菌種進(jìn)行各種處理，如培養(yǎng)基的靈敏度檢查、無菌檢查及微生物限度檢查方法的驗(yàn)證、陽 性對(duì)照、***效價(jià)的微生物檢定時(shí)菌種及菌懸液制備、轉(zhuǎn)接種等，這些活動(dòng)要直接處理微生物菌種，在一定條件下，許多種類都是病原菌，因此有關(guān)微生物暴露性操作活動(dòng)盡可能在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行。所有染菌物品、培養(yǎng)物均應(yīng)經(jīng)高壓**處理后再清洗。

（2）無菌檢查及微生物限度檢查中陽性對(duì)照菌液加入含供試品的培養(yǎng)基的操作，不能在檢測(cè)供試品的無菌室或凈化臺(tái)上進(jìn)行，以免污染 供試品及操作環(huán)境。可設(shè)置一間陽性接種室進(jìn)行上述操作。以前有的將其設(shè)置為一般環(huán)境；有的根本就未專設(shè)此室。

3.2 無菌室    

《中國藥典》要求無菌藥品的無菌性檢查室、非無菌藥品的微生物限度檢查室的環(huán)境潔凈度都為10 000級(jí)（局部潔凈度100級(jí)），通常都 稱為無菌室；若某藥廠既生產(chǎn)無菌藥品，也生產(chǎn)非無菌藥品，為防止非無菌藥品供試品對(duì)無菌藥品的無菌性檢查的污染，有兩種方式：

① 如果同時(shí)進(jìn)行這兩類藥品的檢驗(yàn)，*好將這兩種無菌室分開設(shè)置二套，使用各自的人凈、物凈系統(tǒng)。此種方式無菌室利用率不高。

② 通常只設(shè)一套無菌室，分期進(jìn)行這兩類藥品的檢驗(yàn)，合理安排檢驗(yàn)規(guī)程、嚴(yán)格操作并經(jīng)驗(yàn)證，確保不對(duì)無菌藥品的無菌性檢查產(chǎn)生污 染。

3.3 隔離系統(tǒng)

2015《中國藥典》無菌檢查法中被為可使用的設(shè)施，它能提供并保持與外界環(huán)境隔離的百級(jí)潔凈度的操作環(huán)境。隔離操作器所處環(huán)境的 級(jí)別取決于它們的設(shè)計(jì)及其應(yīng)用。美國藥典并不要求它安裝在潔凈區(qū)/室，但應(yīng)控制無關(guān)人員進(jìn)入其所處房間；歐盟GMP則建議應(yīng)將它放 置于100 000級(jí)的環(huán)境中。

采用隔離操作技術(shù)能*大限度降低操作人員和外界環(huán)境對(duì)潔凈空間的影響。它既可用于無菌實(shí)驗(yàn)，又可用于其他需要高潔凈度的多種研究 和實(shí)驗(yàn)。

但隔離操作器的性能與操作程序的驗(yàn)證尤為重要，隔離用袖管/手套系統(tǒng)應(yīng)進(jìn)行常規(guī)監(jiān)測(cè)，這包括經(jīng)常進(jìn)行必要的檢漏試驗(yàn)。隔離系統(tǒng)的 諸多優(yōu)勢(shì)如潔凈區(qū)域的隔離化、自動(dòng)化、小型化等將使其成為無菌區(qū)的發(fā)展未來。

3.4培養(yǎng)室      

用來放置培養(yǎng)各類微生物生長的**培養(yǎng)箱和**培養(yǎng)箱。大多數(shù)將其設(shè)置為一般環(huán)境；也有的將其潔凈度設(shè)置為100 000級(jí)。設(shè)計(jì)時(shí)根據(jù)藥廠相關(guān)部門的要求進(jìn)行。

3.5 案例圖1中無菌檢查采用環(huán)境潔凈度10 000級(jí)下的局部潔凈度100級(jí)；

藥品生產(chǎn)企業(yè)微生物實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)圖2中無菌檢查采用環(huán)境潔凈度100 000級(jí)下的無菌隔離系統(tǒng)，對(duì)目前需要改造而面積及空調(diào)系統(tǒng)受原有條件限制的微生物實(shí)驗(yàn)室來說較為適用。微生物實(shí)驗(yàn)室的其他輔助設(shè)施在設(shè)計(jì)時(shí)與理化實(shí)驗(yàn)室一起統(tǒng)籌考慮。

藥品生產(chǎn)企業(yè)微生物實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》要求藥品生產(chǎn)企業(yè)生物檢定、微生物和放射性同位素的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)分時(shí)進(jìn)行。避免實(shí)驗(yàn)間的交叉污染，以不影響數(shù)據(jù)的測(cè)定。無菌檢查、微生物室和陽性對(duì)照室分開固然能解決不同實(shí)驗(yàn)的交叉污染問題，若與無菌室等共用凈化空調(diào)系統(tǒng)，一旦因操作失誤或其他原因造成環(huán)境污染，則所有同一空調(diào)系統(tǒng)下的實(shí)驗(yàn)室都將被污染，所以其必須是獨(dú)立的空調(diào)系統(tǒng)。陽性對(duì)照室且回風(fēng)應(yīng)直排，微生物檢查室建議且回風(fēng)應(yīng)直排，只有無菌檢查室可以利用回風(fēng)，這樣才能保證整個(gè)環(huán)境不產(chǎn)生交叉污染。